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Perguntas frequentes
Quais metodologias de síntese a Biorunstar usa para a síntese de peptídeos?
RE: A Biorunstar desenvolveu diferentes metodologias de síntese de fase de solução para atender às necessidades dos clientes. Normalmente, a química Fmoc em fase sólida é aplicada.
Como você envia peptídeos? Quais dados de CQ serão fornecidos?
RE: Todos os peptídeos serão enviados pela DHL ou FedEx Express como pó liofilizado em frascos individuais bem rotulados, em temperatura ambiente. Com exceção dos peptídeos brutos, que só serão verificados por espectrometria MALDI-MASS, todos os peptídeos sintéticos purificados vêm com relatório de projeto (CoA), dados de MS e dados de HPLC. serão fornecidas folhas de dados contendo as principais características, como sequência peptídica, pureza, quantidade, modificação, dados de espectro de massa e dados de HPLC.
Qual é o tempo de resposta típico para a síntese de peptídeos? Quanto tempo leva para enviar para mim?
RE: Nosso tempo de resposta típico é de 2-3 semanas para um peptídeo padrão com menos de 30 aminoácidos. O tempo de resposta varia dependendo do comprimento, quantidade, solubilidade e dificuldade do peptídeo. Normalmente 3-5 dias para alcançar pesquisadores de outros países.
Quanto tempo você pode sintetizar?
RE: Biorunstar tem vasta experiência na síntese de peptídeos longos, até 130aa. Ao contrário de muitos fornecedores de peptídeos que só se sentem confortáveis em produzir peptídeos com menos de 30 ou 40aa, a Biorunstar tem boa experiência na produção de peptídeos variando de 40aa a 90aa. É difícil sintetizar peptídeos longos, especialmente 100aa ou mais. Se você planeja sintetizar uma sequência de 130aa ou mais, entre em contato conosco para obter um serviço personalizado de expressão e purificação de proteínas.
E se surgirem alguns problemas durante o processo de síntese ou purificação?
RE: Cada peptídeo possui características específicas. Se ocorrerem alguns problemas durante a síntese além da nossa expectativa, e não conseguirmos entregar seu peptídeo no prazo, informaremos o mais breve possível. Por acaso não conseguimos fazer o peptídeo, não será cobrado nenhum custo.
Forma de sal TFA, forma de sal acetato ou HCl: Qual forma devo escolher?
Por padrão, os peptídeos são sintetizados no sal TFA. Para experimentos relacionados à cultura de células ou tecidos, você deve considerar a produção de peptídeos na forma de acetato ou sal de HCl a 98% ou mais para evitar respostas anormais. A forma de acetato ou sal HCl pode ser solicitada por um custo adicional.
Qual é o prazo de validade de um peptídeo?
RE: Os peptídeos são estáveis por no mínimo um ano se armazenados liofilizados no freezer. Se os peptídeos forem dissolvidos, o prazo de validade pode ser reduzido. Se os peptídeos contiverem vários aminoácidos reativos que podem ser oxidados como Trp, Met, mas especialmente Cys, o prazo de validade também pode ser reduzido.
O peptídeo contém várias cisteínas e pode, portanto, formar facilmente ligações dissulfeto. Como posso evitar isso?
RE: Se a sequência peptídica contém várias cisteínas, ou outros aminoácidos reativos, que são facilmente oxidados, a Biorunstar se oferece para entregar o peptídeo com vestígios do forte redutor DTT. O peptídeo só é entregue com TDT se tal for especificamente permitido pelo cliente.
Como posso armazenar meus peptídeos sintéticos?
RE: A maioria dos peptídeos liofilizados permanecerá estável à temperatura ambiente por 2-3 semanas. Para armazenamento a longo prazo, você deve armazenar peptídeos liofilizados a -20 grau. Ciclos repetidos de congelamento e descongelamento devem ser evitados. Deixe atingir a temperatura ambiente antes de abrir. A vida útil das soluções peptídicas é limitada; uma solução peptídica, uma vez preparada, deve ser usada o mais rápido possível.
Qual é a pureza do peptídeo bruto e do peptídeo dessalinizado? Como você purifica o peptídeo? Quais são as impurezas?
RE: Para peptídeos curtos com sequências normais abaixo de 15aa, é geralmente 40-60% por HPLC para grau bruto; 50-70% por HPLC para grau dessalinizado. Quanto mais longo for o peptídeo, menor será a pureza do produto bruto ou dessalinizado. Os péptidos são geralmente purificados por HPLC utilizando gradiente de água e acetonitrilo. A maioria das impurezas são fragmentos ou peptídeos de deleção, peptídeos incompletamente desprotegidos e sal e água residuais.
Explicação da Pureza do Peptídeo por HPLC, Conteúdo Total do Peptídeo e Conteúdo Peptídico Alvo.
RE: A Biorunstar envia peptídeos de acordo com o peso bruto do pó liofilizado. O pó liofilizado inclui impurezas tais como fragmentos ou peptídeos de deleção, peptídeos incompletamente desprotegidos, TFA e água residual. A Pureza do Peptídeo é medida por HPLC. É a quantidade de peptídeo correto em relação a todos os analitos que absorvem a ~214 nm (a ligação peptídica é absorvida), provavelmente deleção, truncamento ou sequências incompletamente desprotegidas, etc. A pureza do peptídeo por HPLC não leva em consideração água e sais que geralmente estão presentes na amostra. O Conteúdo Total de Peptídeos é a porcentagem do total de peptídeos presentes em relação a tudo o que está presente no peptídeo em pó liofilizado. O conteúdo total de peptídeos é determinado por análise do conteúdo de nitrogênio. O Conteúdo de Peptídeo Alvo no pó de peptídeo liofilizado pode assim ser concluído pela fórmula: Conteúdo Total de Peptídeo X Pureza de Peptídeo por HPLC.
Qual é o método de marcação com fluoresceína?
RE: FITC (isotiocianato de fluoresceína) é o precursor ativado usado para marcação de fluoresceína. Para a rotulagem Nterminal eficiente, um aminohexanoil de sete átomos
espaçador (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) é inserido entre o fluoróforo (fluorosceína) e o Terminal N do peptídeo. Este espaçador ajuda a separar o fluoróforo do seu ponto de fixação, reduzindo potencialmente a interação do fluoróforo com a biomolécula à qual está conjugado e tornando-o mais acessível aos reagentes de detecção secundária.
espaçador (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) é inserido entre o fluoróforo (fluorosceína) e o Terminal N do peptídeo. Este espaçador ajuda a separar o fluoróforo do seu ponto de fixação, reduzindo potencialmente a interação do fluoróforo com a biomolécula à qual está conjugado e tornando-o mais acessível aos reagentes de detecção secundária.
A marcação C-terminal da Biotina (ou FITC) é possível?
RÉ: Sim. A marcação C-terminal da Biotina (ou FITC) é feita pela adição de um resíduo de Lisina no C-terminal de um peptídeo, e a Biotina (ou FITC) é ligada à cadeia lateral da Lisina através de uma ligação amida. A carga positiva da lisina é removida.
Qual é o comprimento apropriado do peptídeo para a produção de anticorpos?
RE: Geralmente, um peptídeo de resíduo 10-25 é recomendado. Um péptido mais longo poderia ter mais epítopos, mas também poderia ter uma maior probabilidade de formar estruturas secundárias estáveis que não sejam formas nativas. Um peptídeo mais curto (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
O que é um MAPA?
RE: MAPS ou Peptídeo Multiantigênico é um peptídeo ramificado no qual cadeias peptídicas lineares estão ligadas em seu terminal C através do núcleo de polilisina, aumentando assim o tamanho da molécula inteira. Isto é feito para eliminar o acoplamento de peptídeos ao KLH. Parece, no entanto, que a conformação dos péptidos no MAP é menos flexível e os anticorpos obtidos pelo MAP normalmente reconhecem a proteína alvo com menos frequência do que pela conjugação convencional com KLH. Além disso, não há peptídeo livre produzido durante a produção de MAPS, dificultando a remoção de anticorpos direcionados ao núcleo de polilisina. A purificação do MAPS por HPLC é difícil e o MAPS é fornecido sem verificação de massa devido à sua heterogeneidade e grande tamanho molecular.
Por que minha solução de peptídeo conjugado com KLH parece turva?
RE: KLH ou Keyhole Limpet Hemocyanin é uma proteína de grande agregação (MW=4x105 – 1x107). Devido ao seu tamanho e estrutura, sua solubilidade em água é limitada, causando aspecto turvo. Isto não afectará a imunogenicidade e a solução turva pode ser utilizada para imunizações.
Você pode explicar os picos de massa M+Na e M+K nos espectros MALDI?
RE: É muito comum ver adutos de Na (sódio) e K (potássio) no espectro MALDI. O sódio e o potássio vêm da água usada nos solventes peptídicos. Mesmo a água destilada e deionizada contém vestígios de íons sódio e potássio, que nunca podem ser totalmente removidos. Estes tornam-se ionizados durante o processo de especificação de massa MALDI e ligam-se aos grupos carboxilo livres do péptido. Como não existe um sistema de purificação de água que remova todos os íons de sódio ou potássio da água, às vezes ver os adutos de sódio e potássio é muito comum e inevitável na especificação de massa MALDI. Isto não é uma indicação de que o peptídeo não seja puro, nem deve ser confundido com um peso molecular incorreto.